微生物檢驗培養基制備有多少步驟？每步應怎么操作？今天中海生物技術zhzbio.com為大家解析微生物檢驗培養基制備的九個步驟關注要點。

步驟一：稱取數量

用1/100的電子天平稱出培養基所需的藥物。首先參照配方計算出配制相應培養基需要各成分的數量，然后用電子天平準確稱取重量（將稱量紙折疊成簸箕盛藥）。 

步驟二：培養基溶化

將中海培養基納入燒杯容器中，加小適量的水，緩慢加水并用玻璃棒小幅度攪拌。倘若培養基中不含瓊脂，則不需要對培養基加熱；相反含有瓊脂，就需要用本生燈/電磁爐加熱煮沸。待培養基完全溶解后再加入適量的水攪拌均勻。如準備的北京中海培養基較多，在不銹鋼鍋中融化加熱，可以用溫水加熱，需不停攪拌，防止焦化。如果不小心出現焦化現象，則制備好的培養基將無法使用，必須重新配制中海生物培養基。

不要使用銅或鐵容器溶解制備培養基，因為銅或鐵容器可能會導致容器內培養基中銅、鐵超標，影響實驗結果，其中培養基中銅含量大于0.3毫克每升，細菌不適宜生長。 

鐵含量超過0.14毫克每升，防止細菌產生毒素。容易發生反應和沉淀的藥物應單獨溶解，然后加入培養基中，如磷酸氫二鉀和硫酸鎂。

步驟三：調培養基pH

雖然中海培養基中含有緩沖物質，可以盡量使培養基的pH值保持在標準范圍內，但如果配制的培養基不能要求，則必須進行必要的調整。如果您有校準過的 pH 計，則可以使用 pH 計。如果沒有，可以使用精確的pH試紙，然后根據需要使用1 mol/L氫氧化鈉或1 mol/L鹽酸進行微調。使用 0.1 氫氧化鈉或 0.1 mol/L 鹽酸進行調整至所需的pH值。

培養基有酸性或堿性，pH值一般為7.4～7.6。對于需要用氫氧化鈉高壓滅菌的介質，將pH調至比要求值高0.1～0.2個單位，因為用氫氧化鈉調節時，高壓滅菌后介質的pH值要降低0.1 ~0.2。如果微生物培養基中含有碳酸鈣，則無需調整pH值。

步驟四：培養基過濾

如果對配制的培養基沒有特殊要求，這一步可以省略。中'海培養基如有渾濁和沉淀現象，可將需要澄清的液體培養基用油紙過濾。固體介質可以用雙層紗布過濾，中間有一層薄薄的脫脂棉。 如果過濾法不能滿足澄清要求，可以采用蛋清澄清法，即將培養基加熱冷卻至五十度至六十度，不超過三角瓶一半的容量。每一千毫升放入1~2個蛋清，用力搖晃三至五分鐘，用121℃高壓蒸汽滅菌二十分鐘，趁熱取出過濾。

步驟五：培養基分裝

準備好的中.海培養基根據用途不同分為燒瓶、試管等容器，分裝試管量大采用自動分液器，分裝試管量小，可以用漏斗分液。分液量不超過容器體積的三分之二。三角瓶不要超過體積的二分之一；瓊脂斜面不要超過試管長度的五分之一。滅菌后斜面應為培養基量的三分之一，底層應為培養基量的三分之二；半固態瓊脂的體積為三分之一；

用于接種或保護細菌的高級瓊脂，分裝試管長度的三分之一和四分之一，接種厭氧菌的量應達到三分之二；瓊脂平板90毫米內徑13~15毫升，內徑70毫米8~10毫升。如果瓊脂平板表面較水，可將平板倒置，置于37℃培養箱中三十分鐘，晾干后使用。每批培養基分裝在二十毫升左右的小玻璃瓶中，與該批培養基同時滅菌，在以確定這批培養基的最終pH值。

步驟六：培養基滅菌處理

分裝完成的培養基應馬上滅菌。其殺毒滅菌方式主要有三種類型：

⑴高壓蒸汽滅菌方式

此方法可用于大多數耐熱培養基。對于小份：使用 121°C 十五分鐘；大份：121°C 三十分鐘；對于含碳水化合物的中.海培養基，僅需 113~115°C 十五分鐘。滅菌以避免糖分的破壞。

⑵煮沸滅菌法方式

此方法可用于含有不耐高溫物質的培養基。

⑶過濾除菌方式

過濾除菌，采用無菌技術定量添加培養基。血液和抗生素可以用無菌技術抽取并加入冷卻至約五十度的培養基中。當中'海培養基中含有不耐熱物質時可以使用此方法。

對LST培養基進行滅菌時，發酵管內可能存在氣泡。為了防止發酵管內形成氣泡，可以采取以下措施：

⑴倒置的小管充滿培養基，不留氣泡，然后加入含有 LST 的試管中。

⑵在關閉殺菌鍋的排氣閥之前，將鍋內的氣體排空。

⑶試管塞不要塞得太緊。使用硅膠塞時，請勿使用橡膠塞。

⑷不可過早打開殺菌鍋，等殺菌鍋內的氣壓和溫度降到與室溫相同或相差不大時再打開殺菌鍋。

如果按照以上方法操作還有氣泡，可以用水作為培養基組的對照試驗。如果培養基組有氣泡，對照組沒有氣泡，可以確定培養基本身原因。

步驟七：培養基倒入平板

將滅菌溶化的培養基冷卻至五十度后，倒入無菌干燥的培養皿中。微生物培養基制備的溫度不能太高，否則培養皿內蓋容易形成過多的冷凝水；溫度太低，中 海培養基容易凝固成塊狀，不能做成平板。倒平板時，要靠近酒精的火焰以防止外來細菌落入盤中。左手托住培養皿，右手托住三角瓶底部。用小指和手掌拉出錐形瓶的棉塞，燒灼燒瓶口，用拇指和食指在培養皿蓋上打開一條縫，直到燒瓶口剛好伸手進去，倒入培養基，直到底部被覆蓋。不要超過培養皿高度的三分之一，迅速蓋上蓋子，放在桌子上，輕輕旋轉培養皿，使培養基分布均勻，凝結后即可。

步驟八：培養基擺斜面

滅菌完成后，將試管中的中海瓊脂培養基放在木棒或玻璃棒上，同時它很熱，并且有適當的坡度。冷卻后使瓊脂凝固并變成斜面。斜面長度不超過試管的二分之一。

步驟九：微生物培養基質檢

檢驗培養基滅菌后，發現有破損，浸水，顏色異常，棉塞被培養基污染。所有這些都必須丟棄，不能重復使用，并確定其最終pH值。 無菌檢查和效果檢查也是必需的。無菌檢查是取1~2瓶無菌培養基，37℃孵育一兩天，確認無細菌生長；效果檢查是將標準菌株接種到相關培養基上進行細菌檢查。 動物的生長、形態和生化條件與已知條件一致。兩個條件都合格，準備好的培養基就可以使用了。

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