胰酪大豆胨瓊脂培養基驗收的注意事項
日期:2024-01-03 | 中海生物技術文庫 | 瀏覽:732 次
1、質控菌株的確認
《中國藥典》四部1105和1108中采用金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌、白色念珠菌和黑曲霉這五株標準菌株對TSA進行適用性檢查;《中國藥典》四部1106和1108中需用TSA對金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、大腸埃希菌和乙型副傷寒沙門菌進行菌液制備;《中國藥典》四部1121中采用金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、大腸埃希菌、白色念珠菌和黑曲霉這五株標準菌株對TSA進行適用性檢查;因此驗收TSA的質控菌株可根據實驗室的具體用途從相關通則中進行選擇。
值得注意的是,除了使用標準菌株驗收TSA,還應增加生產環境及產品中常見的污染菌株。雖然標準菌株涵蓋了自然環境中最為常見的微生物種類,包括革蘭氏陽性球菌和桿菌、革蘭氏陰性桿菌、產芽孢的桿菌以及真菌,但不能完全代表樣品中部分較為特殊的菌群。曾有學者考察過8個廠家TSA(對藥典要求的標準菌株均具有良好的促生長能力)對人參土芽孢桿菌的促生長能力(回收率)[1],結果培養5天后,仍有3個廠家TSA不能達到50%的回收率。即人參土芽孢桿菌對TSA的質量具有更好的篩選區分能力,該文章也建議將人參土芽孢桿菌作為質控菌株進行TSA的適用性試驗,避免由于培養基促生長能力不足而導致誤判的風險。
2、pH值監控
pH值是培養基的常規監控項目,TSA的標準為滅菌后在25℃的pH值為7.3±0.2。
3、培養基性狀
培養基性狀也是驗收TSA的關鍵項,直接影響能否順利完成試驗以及結果的準確性。
對于商品化的脫水培養基,首先要確認干粉粉末是否均一,顏色是否發生變化,若為顆粒型培養基,需確認其粒度及溶解性;其次要確認滅菌后培養基外觀顏色是否正常、是否澄清無異物;制備好平板后,軟硬程度要適合涂布、劃線、倒置培養等基礎微生物操作;若采用傾注法,需確認融化的TSA培養基在45~50℃的環境中放置8小時無凝固現象。
對于商品化的預制培養基,最重要的是培養基的無菌性檢查;其次要確認外包裝完整無損,無過多水汽,平板顏色正常、無異物、無氣泡,倒置培養無掉板現象等。
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