禽流感（H9 亞型）血凝抑制試驗(yàn)抗原使用說(shuō)明書(shū)
日期：2023-12-06 | 中海生物技術(shù)文庫(kù) | 瀏覽：649 次
【獸藥名稱(chēng)】
通用名稱(chēng)：禽流感（H9 亞型）血凝抑制試驗(yàn)抗原
商品名稱(chēng)：無(wú)
英文名稱(chēng)：Avian Influenza Virus(H9 subtype) Antigen for
Blood Hemagglutination Inhibition Test
漢 語(yǔ) 拼 音 ： Qiuliugan(H9 yaxing)Xueningyizhishiyan
Kangyuan
【主要成分與含量】本抗原為滅活的禽流感（H9 亞型）病毒，
血凝效價(jià)≧1:128（即 2
7
）
【性狀】為疏松團(tuán)塊。
【作用與用途】適用于血凝抑制試驗(yàn)檢測(cè)禽流感（H9 亞型）病
毒抗體
【用法與判定】
1 材料
移液器及吸頭、1/15mol/L PBS（pH 值 7.0-7.2）、96 孔微量血
凝板（V 型）、1%（V/V）雞紅細(xì)胞懸液、加樣槽等。
2 試驗(yàn)操作
2.1 血凝試驗(yàn)（HA）
2.1.1 96 孔微量血凝板 1-12 孔加入 PBS0.025ml，取抗原 0.025ml
加入第 1 孔中，反復(fù)稀釋 5～10 次混勻，從第 1 孔中取 0.025ml 加入第 2 孔，稀釋混勻取 0.025ml 加入第 3 孔，依此倍比稀釋至第 11 孔，
第 12 孔作為紅細(xì)胞對(duì)照孔。每孔補(bǔ)加 PBS0.025ml，再加入 1%（V/V）
雞紅細(xì)胞懸液 0.025ml，血凝板震蕩混勻，室溫放置 15～40 分鐘或
置 2～8℃40～60 分鐘。
2.1.2 結(jié)果判定 將血凝板傾斜 60 度，當(dāng)對(duì)照孔中的紅細(xì)胞呈顯
著流淌的淚滴狀時(shí)判讀結(jié)果。以使紅細(xì)胞完全凝集的最高稀釋度作為
血凝價(jià)。
2.2 血凝抑制試驗(yàn)（HI）
2.2.1 依據(jù)抗原 HA 血凝效價(jià)，配制 4 個(gè)血凝單位抗原（4HAU）。
舉例:血凝效價(jià)為 1:128，即 128/4=32（即稀釋倍數(shù)為 1:32）。取 PBS
9ml,加入抗原 1.0ml,（即成 1:10 稀釋?zhuān)┱鹗幓靹蛉?1.0ml，加入
2.2mlPBS 中，使最終濃度為 1:32。對(duì)其血凝價(jià)進(jìn)行回歸檢驗(yàn)校準(zhǔn)后，
2～8℃存放待用。
2.2.2 96 孔微量血凝板 1-11 孔加入 PBS0.025ml，第 12 孔加入
PBS0.05ml，取待檢血清 0.025ml 加入第 1 孔中，反復(fù)稀釋 5～10 次
混勻，從第 1 孔中取 0.025ml 加入第 2 孔，稀釋混勻取 0.025ml 加入
第3孔，依此倍比稀釋至第10孔。取4HAU于1-11孔每孔加入0.025ml，
血凝板震蕩混勻，37℃作用 20 分鐘。再每孔加入 1%（V/V）雞紅細(xì)
胞懸液 0.025ml。第 11 孔為 4HAU 對(duì)照孔，第 12 孔為紅細(xì)胞對(duì)照孔。
將血凝板震蕩混勻，室溫放置 15～40 分鐘。
2.2.3 結(jié)果判定 將血凝板傾斜 60 度，若 4HAU 對(duì)照孔無(wú)紅細(xì)胞
凝集，紅細(xì)胞對(duì)照孔有紅細(xì)胞凝集，且呈明顯流淌的淚滴狀時(shí)，試驗(yàn)成立，可判讀結(jié)果。使紅細(xì)胞凝集被完全抑制的血清最高稀釋度判為
被檢血清 HI 效價(jià)。
【注意事項(xiàng)】
1．倍比稀釋時(shí)，吸液、吐液動(dòng)作不應(yīng)過(guò)快，防止污染其他孔及
取量不準(zhǔn)確。
2．4HAU 應(yīng)現(xiàn)用現(xiàn)配，使用時(shí)充分混勻。
3．使用 1%雞紅細(xì)胞懸液時(shí)，應(yīng)輕搖混勻。
4．因環(huán)境溫度不同，判定結(jié)果時(shí)，可依據(jù)對(duì)照孔情況，適當(dāng)調(diào)
整作用時(shí)間。
5．設(shè)立陰、陽(yáng)性血清對(duì)照，且當(dāng)陰性對(duì)照血清 HI 效價(jià)≦1:4、
陽(yáng)性對(duì)照血清 HI 效價(jià)與已知結(jié)果相比，誤差≤1 個(gè)稀釋度時(shí)，試驗(yàn)
方可成立。
6.抗原使用前需用無(wú)菌生理鹽水復(fù)溶。
【規(guī)格】 2ml/瓶
【貯藏與有效期】 -15℃以下保存，有效期為 12 個(gè)月
【包裝】 10 瓶/盒
僅供獸醫(yī)診斷使用
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