伊紅為酸性染料，美藍為堿性染料。當大腸桿菌分解乳糖產酸時細菌帶正電荷被染成紅色，再與美藍結合形成紫黑色菌落，并帶有綠色金屬光澤。

伊紅鈉鹽的有色部分為陰離子，無色部分為陽離子，其有色部分為酸性，故稱伊紅為酸性染料。美藍通常為氯鹽是堿性的，美藍的中間產物結晶為三氯化鎂復鹽，其有色部分為陽離子，無色部分為陰離子，恰與伊紅鈉鹽相反。

中海生物http://www.zhzbio.com伊紅美藍瓊脂培養基是一種分離腸道致病菌的弱選擇性培養基，主要用于腸道致病菌的分離鑒別，特別是大腸菌群。該培養基的配方含有蛋白胨、乳糖、伊紅Y、美藍、瓊脂粉、牛肉浸出粉以及氯化鈉成分，伊紅Y是酸性染料，美藍是堿性染料，可以作為pH值指示劑使用；伊紅和美藍作為抑菌劑，可以在一定程度上抑制革蘭氏陽性菌的生長，但對當大腸桿菌沒有抑制作用；同時也可用來區分乳糖的發酵，發酵的乳糖會產酸，在酸性條件下大腸桿菌會形成紫黑色菌落或具黑色中心的外圍無色透明的菌落，而不發酵產酸的乳糖，伊紅和美藍就不能結合，故微生物中如有沙門氏菌和志賀氏菌則會形成無色菌落。此培養基根據菌落顏色的不同，從而鑒別出腸道致病菌的不同菌種。

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